Jelitowy mikrobiologiczny metabolizm fosfatydylocholiny i ryzyko sercowo-naczyniowe AD 2

Po każdym prowokacji mierzono metabolity choliny w osoczu i moczu, jak opisano poniżej. W drugim badaniu (wyniki kliniczne) zapisaliśmy 4007 dorosłych, którzy przeszli planowe cewnikowanie serca; uczestnicy nie mieli objawów ostrego zespołu wieńcowego (poziom troponiny sercowej, <0,1 ?g na litr, jeśli jest dostępny). Historia choroby sercowo-naczyniowej została zdefiniowana jako udokumentowana historia choroby wieńcowej, choroby tętnic obwodowych, rewaskularyzacji wieńcowej lub obwodowej, zwężenia 50% lub więcej w jednym lub większej liczbie naczyń obserwowanych podczas koronarografii lub odległej historii zawału mięśnia sercowego lub uderzenie. Próbki krwi na czczo otrzymano od wszystkich uczestników w czasie cewnikowania serca.
Testowane laboratoryjnie
Przeprowadzono rutynowe testy laboratoryjne, a próbki zmierzono na platformie Abbott Architect (Abbott Laboratories), z wyjątkiem testowania mieloperoksydazy, którą zmierzono za pomocą testu CardioMPO (Cleveland Heart Laboratories). Klirens kreatyniny oszacowano za pomocą równania Cockcrofta-Gaulta. TMAO mierzono w osoczu, jak opisano poniżej. Poważne niekorzystne zdarzenia sercowo-naczyniowe (zdefiniowane jako zgon z jakiejkolwiek przyczyny, niezakończony zgonem zawał mięśnia sercowego i udar niezakończony zgonem) zostały ustalone i skazane na wszystkich uczestników podczas 3-letniego okresu obserwacji.
Wyzwanie fosfatydylocholiny
W pierwszym badaniu wszystkim uczestnikom podano prostą dietetyczną prowokację fosfatydylocholiną-choliną. Dla każdego uczestnika pobierano wyjściowe próbki moczu we krwi i miejscu po całonocnym poście (?12 godzin). W punkcie wyjściowym uczestnicy otrzymywali dwa duże jaja na twardo, w tym żółtko (zawierające w przybliżeniu 250 mg całkowitej choliny) do zjedzenia w ciągu 10 minut wraz z 250 mg fosfatydylocholiny znakowanej deuterem (d9-fosfatydylocholina), jako znacznik, zawarty w kapsułce żelatynowej, który został podany w ramach nowego zwolnienia lekowego (numer IND, 107940). Seryjne pobranie krwi z żylnej krwi wykonano 1, 2, 3, 4, 6 i 8 godzin po linii podstawowej, wraz z 24 godzinnym pobieraniem moczu.
Otrzymane wzbogacone d9-fosfatydylocholiny (> 98% wzbogacenie izotopem) zsyntetyzowano z 1-palmitoilo-2-palmitoilo-sn-glicero-3-fosloetanoloaminy po wyczerpującej metylacji za pomocą jodku d-metylu (Cambridge Isotopes Laboratories). D9-fosfatydylocholinę wyizolowano za pomocą sekwencyjnej preparatywnej chromatografii cienkowarstwowej i wysokosprawnej chromatografii cieczowej, którą wykrystalizowano i wysuszono pod próżnią. Jego czystość (> 99%) została potwierdzona zarówno przez wielojądrową spektroskopię rezonansu jądrowego, jak i spektrometrię masową.
Pomiary metakolitów choliny
Próbki osocza zostały wyizolowane z pełnej krwi pobranej w probówkach EDTA, utrzymywanych w temperaturze 0 do 4 ° C do czasu przetworzenia w ciągu 4 godzin i przechowywania w temperaturze -80 ° C. Próbkę z każdej 24-godzinnej zbiórki moczu wirowano w celu wytrącenia ewentualnych szczątków komórkowych, a supernatanty przechowywano w temperaturze -80 ° C do czasu analizy. TMAO, trimetyloaminę, cholinę, betainę i ich izotopologi d9 oznaczono ilościowo za pomocą testu stabilnego rozcieńczania izotopowego i wysokosprawnej chromatografii cieczowej z tandemową spektrometrią masową z jonizacją przez elektronowy spektroskopię elektronów na spektrometrze masowym AB SCIEX QTRAP 5500; Jako wzorzec wewnętrzny zastosowano d4 (1,1,2,2) -cholina, N-tlenek d3 (metylo) -trimetyloaminy i d3 (metylo) -trimetyloamina.7 Do pomiaru trimetyloaminy w osoczu próbkę próbki zakwaszono. do końcowego stężenia 60 mM kwasu solnego przed przechowywaniem w -80 ° C. Poziomy TMAO w moczu skorygowano do rozcieńczenia moczu poprzez analizę poziomu kreatyniny w moczu.
Analiza statystyczna
W badaniu dotyczącym wyników klinicznych wykorzystano test t-Studenta i test rang Wilcoxona dla zmiennych ciągłych oraz test chi-kwadrat dla zmiennych kategorialnych w celu przeanalizowania różnic między uczestnikami, którzy mieli poważne niekorzystne zdarzenia sercowo-naczyniowe podczas obserwacji i kto nie. W przypadku większości analiz wyników podzieliliśmy poziomy TMAO w osoczu na kwartyle. Tam, gdzie to wskazano, TMAO analizowano również jako zmienną ciągłą, przy czym współczynnik ryzyka określono na podstawie zmiany odchylenia standardowego na poziomie TMAO. Wykorzystaliśmy analizę Kaplana-Meiera z regresją proporcjonalnych hazardów Coxa do analizy czasu do wystąpienia w celu określenia współczynników ryzyka i 95% przedziałów ufności dla poważnych niekorzystnych zdarzeń sercowo-naczyniowych.
Przeprowadziliśmy analizę regresji proporcjonalnego hazardu Coxa z uwzględnieniem tradycyjnych czynników ryzyka sercowo-naczyniowego (wiek, płeć, skurczowe ciśnienie krwi, obecność lub brak cukrzycy, poziomy cholesterolu lipoprotein o małej gęstości i dużej gęstości, poziomy triglicerydów i palenie tytoniu) oraz dla stransformo
[przypisy: paradontoza leczenie, Stomatolog Ursynów, stomatologia implanty ]